Ф.И.О.
Ушакова Яна Владимировна
Ученая степень
• кандидат биологических наук
Ученое звание
—
Почетное звание
—
Организация, должность
• Северо-Кавказский федеральный научный центр садоводства, виноградарства, виноделия
научный сотрудник
Научные интересы
биохимия, аналитическая химия, физиология растений
Адрес веб-сайта
—
Электропочта
Текущий рейтинг (суммарный рейтинг статей)
0
TOP5 соавторов
Статей в журнале: 1 шт
Сформировать список работ, опубликованных в Научном журнале КубГАУ
-
Модифицированный протокол выделения РНК из зрелых листьев винограда для проведения ОТ-ПЦР
Краткое описание
Выделение высококачественной РНК из тканей многолетних древесных растений, в том числе и винограда, представляет большую сложность в связи с высоким содержанием фенольных соединений, вторичных метаболитов и полисахаридов и рибонуклеазной активностью разрушенных тканей. Большинство методов требуют больших временных или финансовых затрат, либо не дают воспроизводимого результата в случае работы со зрелыми тканями винограда. Был разработан протокол выделения на основе комбинирования и модификации известных методов экстракции РНК с учетом особенностей зрелых тканей винограда. Коммерческие наборы для выделения РНК из тканей растений показали невысокую эффективность экстракции РНК из зрелых тканей винограда, прежде всего связанную с «сортовой спецификой». Воспроизводимые результаты при экстрагировании РНК показывал CTAB-метод, но он имел ряд недостатков: длительность и сложность обработки препарата РНК ДНК-азой. Разработанный метод основан на повышении концентрации меркаптоэтанола и поливинилпирролидона в экстрагирующем буфере, исключении этапа селективного осаждения РНК LiCl и замене его на осаждение на мембране на основе силики (SiO2) с последующей обработкой ДНК-азой, Данные модификации в два раза сокращают временные затраты на выделение РНК и повышают чистоту препарата РНК от геномной ДНК в сравнении с исходной методикой. Данное решение позволяет получать воспроизводимые количество и качество РНК для последующего синтеза кДНК и RT-PCR
pdf 438.875kb
doc 438.875kb