Институт фундаментальных проблем биологии РАН
Список авторов организации
Список статей, написанных авторами организации
-
Конструирование мутантов бактериофага Т4 со сниженной антигенностью
Краткое описание
На модели бактериофага Т4 исследовали способ получения инсерционных мутантов по гену hoc, кодирующему основной антиген фага. Этот ген, клонированный на плазмиде, был нарушен путем вставки чужеродной ДНК и затем с помощью рекомбинации in vivo получены мутанты фага по типу вставки. Получение мутантов бактериофага по типу вставки проводили в два этапа. На первом этапе получали фаги-интегранты, и фаги- сегреганты получали на втором этапе. Мутанты, полученные в результате этой методики, можно было выращивать на штаммах E.coli дикого типа, что удобно для производства и применения данных фагов в терапии. Полученные мутанты обладали сниженной антигенностью. Вместе с тем они давали хороший урожай при выращивании фагов на бессупрессорных лабораторных штаммах E. Coli. Путем нескольких периодических выращиваний мутантных бактериофагов было показано, что мутации данного типа стабильно поддерживаются более чем в 50 поколениях. Был отработан ряд этапов очистки полученных мутантов бактериофагов. Препараты бактериофагов были исследованы с помощью трансмиссионной электронной микроскопии и масс-спектрометрии белков. Показано, что частичная очистка этих бактериофагов с помощью осаждения полиэтиленгликолем позволяет получить гомогенный препарат годный для дальнейшего изучения и доклинических исследований. Родственные Т4 бактериофаги семейства Myoviridae, например, Т-четные, обладают существенной гомологией геномов, что позволяет получать на их основе опробованным методом аналогичные мутанты. Таким образом, разработан способ получения мутантов со сниженной антигенностью для их применения как при лечении системных инфекций, так диарей, когда возможно попадание бактериофагов в кровяное русло. Подобные фаги могут найти свое применение в медицине и ветеринарии
pdf 1.244.633kb
doc 1.244.633kb